Immunofluorescence directe

Qu'est-ce qui est direct immunofluorescence?

L'immunofluorescence directe (DIF) est une technique utilisée en laboratoire pour diagnostiquer les maladies de la peau, des reins et d'autres systèmes d'organes. Également appelé test de fluorescence immunitaire directe ou primaire immunofluorescence

DIF implique l'application de anticorps–fluorophore conjuguer molécules aux échantillons de tissus des patients obtenus à partir de biopsies. Ces fluorophores-anticorps conjugué cible anormale mouvements intestinaux des protéines dans les tissus du patient. Lorsqu'il est exposé à la lumière, le fluorophore émet sa propre fréquence de lumière, vue au microscope. Le schéma de coloration particulier et le type de protéine anormale. déclaration vu dans l'échantillon de tissu aide à diagnostiquer la maladie.

Immunofluorescence directe pour le diagnostic des maladies de la peau.

Le DIF est utile pour diagnostiquer les soupçons auto-immune maladie, tissu conjonctif maladies et vascularite. Les profils de coloration observés dans les échantillons de tissus peuvent être spécifiques à une entité pathologique ou doivent être interprétés avec la clinique et histologique recommandations.

Auto-immune bulleux maladies

Le DIF est utile pour diagnostiquer les cloques auto-immunes suivantes:

• Pemphigus vulgaris
• Pemphigus à feuilles
• Paranéoplastique pemphigus
• Immunoglobuline (Ig)A pemphigus
• Pemphigoïde bulleuse
• Pemphigoïde gestationnelle
• Muqueux pemphigoïde membranaire (cicatrice pemphigoïde)
• Epidermolyse bulleuse acquise

• Bullous systémique lupus érythémateux (LED)

• Linéaire Maladie vésiculeuse IgA
• Dermatite herpétiforme

Maladies du tissu conjonctif

Le DIF est utile pour diagnostiquer les maladies du tissu conjonctif suivantes:

• Le lupus érythémateux disséminé, discoïdeet subaiguë cutané formes)

• Néonatal lupus érythémateux
• Systémique sclérose
• Maladie du tissu conjonctif mixte

• Dermatomyosite

Vascularite et autres conditions.

Le DIF est utile dans le diagnostic de la vascularite cutanée et de certains autres types de inflammatoire Maladie de la peau:

• Petit navire (hypersensibilité) vascularite
• Henoch - Schönlein violet
• Lichen planus
• Porphyrie cutanée retardée
• Certaines réactions cutanées indésirables aux médicaments.
• Photosensibilité des éruptions cutanées

Site de biopsie

Le site optimal pour effectuer une biopsie cutanée dépend de la maladie suspectée.

• Maladies vésiculeuses auto-immunes: regardez normalement périlésionnel peau à moins de 1 cm d'un bulla. Étant donné que des résultats faussement négatifs peuvent provenir d'échantillons des membres inférieurs, évitez ces sites si possible.
• Maladies du tissu conjonctif: la biopsie doit être prélevée sur un blessure (souvent dans des zones exposées au soleil), idéalement âgées de plus de 6 mois mais toujours actives. Un échantillon supplémentaire est souvent prélevé sur un site protégé du soleil.
• Vascularite: Pour de meilleurs résultats, prenez biopsie de ponction ou un profondbiopsie de rasage d'une blessure de moins de 24 heures.

En règle générale, une autre biopsie pour l'hématoxyline-éosine (H&E) de routine est effectuée. histologie. Notez que le site de biopsie optimal et le délai requis diffèrent pour ces exemples.

• Maladies vésiculeuses auto-immunes: supprimer un entier vésicule ou biopsie du bord d'une ampoule.
• Vascularite: Sélectionnez une lésion purpurique de moins de 72 heures.

Transport et stockage de l'échantillon de biopsie.

Les échantillons DIF ne doivent pas être placés dans du formol, car cela perturbe les protéines et diminue considérablement la précision des résultats. Transportez l'échantillon au laboratoire dès que possible. Les options de transport de l'échantillon incluent:

• Placé dans un salinegaze trempée
• En solution saline Solution
• Dans des médias spéciaux (par exemple Michel ou Zeus)
• Congelé dans de l'azote liquide (il ne faut pas laisser l'échantillon décongeler).

Chaque laboratoire a ses propres protocoles. Des échantillons dans une solution saline peuvent produire plus haute Sensibilité par rapport aux autres supports si traité dans les 24 à 48 heures.

Qu'advient-il de l'échantillon dans le laboratoire?

Le DIF peut être effectué sur une machine automatisée ou manuellement. Le processus consiste d'abord à faire des coupes congelées puis à immunofluorescence.

Préparer des sections surgelées

1. Une biopsie de ponction est transportée au laboratoire dans une gaze imbibée de solution saline.
2. L'échantillon est placé dans un gel.
3. L'azote liquide est utilisé pour geler l'échantillon et le gel.
4. L'échantillon congelé est contenu dans le gel congelé.
5. L'échantillon peut être conservé dans de l'azote liquide pendant environ une semaine.
6. Des tranches de 4 à 6 microns d'épaisseur sont coupées.

Immunofluorescence directe.

1. Cinq ou six diapositives sont réalisées; chacun pour un autre réactif. Une lame sera utilisée pour la coloration H&E normale.
2. Un stylo spécial est utilisé pour dessiner un périmètre pour tenir réactifs à l'intérieur des diapositives.
3. Les lames sont lavées.
4. Les réactifs sont composés.
5. Les réactifs (anticorps-fluorophore sont conjugués avec IgG, IgM, IgA, complément Protéine C3, et si nécessaire fibrinogène) sont déposés sur les diapositives et les diapositives sont laissées dans le noir pendant un certain temps.
6. Les lames sont à nouveau lavées en solution.
7. Des couvercles en verre sont placés sur les lames.

Interprétation de l'immunofluorescence directe.

Les lames d'immunofluorescence préparées sont examinées à l'aide d'un pathologiste pour déterminer les principaux sites de dépôt immunitaire (le cas échéant), les classes d'immunoglobulines ou d'autres dépôts immunitaires et les modes de dépôt. Les modèles de coloration peuvent être classés en cinq groupes:

• Schéma de coloration de surface intercellulaire (ICS)
• Linéaire surface de la membrane du sous-sol (BMZ) modèle
• Motif granulaire BMZ
• Shaggy BMZ pattern
• Vasculaire et d'autres modèles.

Exemples de motifs de coloration.

• Coloration de l'espace intercellulaire (fil de poulet), pemphigus vulgaris.
• Coloration de l'espace intercellulaire (fil de poulet), pemphigus foliaire.
• Dépôt linéaire d'IgG dans la zone de la membrane basale, pemphigoïde bulleuse.
• Dépôt d'IgA linéaire dans la zone de la membrane basale, IgA linéaire bulleuse maladie de peau.
• Coloration vasculaire dans dermique lunettes pour IgM.
• Dépôt granulaire de C3 dans la zone de la membrane basale

Modèles de coloration de maladies cutanées spécifiques.

Pemphigus vulgaris

• Norme ICS IgG (90–100%) ou C3

Pemphigus à feuilles

• Modèle ICS IgG ou C3

Pemphigus paranéoplasique

• Modèle ICS faible
• BMZ IgG ou C3 linéaire ou granulaire
• Des fois, lichénoïde changement

Pemphigus IgA

• ICS avec IgA

Pemphigoïde bulleuse

• BMZ linéaire avec IgG et BMZ linéaire avec C3

Membrane muqueuse pemphigoïde (pemphigoïde cicatricielle)

• BMZ linéaire avec IgG, C3 et IgA

Epidermolyse bulleuse acquise

• BMZ IgG et C3 linéaires
• Parfois linéaire BMZ IgA ou IgM

Dermatite herpétiforme

• BMZ granulaire avec IgA
• Parfois BMZ C3 granulaire
• Rarement, BMZ IgG granulaire et M3

Lupus érythémateux

• Le lupus érythémateux disséminé
  • BMZ granulaire IgG, IgM, IgA, C3
  • Tacheté épidermique noyaux Norme IgG (10-15%)
• Lupus érythémateux discoïde
  • BMZ IgG granulaire, IgM
  • Corps cytoïdes IgM et IgA
• Lupus érythémateux cutané subaigu
  • BMZ IgG granulaire, IgM, C3
  • Épidermique intracytoplasmique Dépôt de particules IgG
  • Corps cytoïdes IgM, IgA

Sclérose systémique

• IgM BMZ granulaire
• Dépôt chiné de noyaux épidermiques (20%)

Maladie du tissu conjonctif mixte

• BMZ granulaire (15%)
• Configuration des noyaux épidermiques marbrés d'IgG (46–100%)

Dermatomyosite

• IgM granulaire, IgG, C3
• Corps cytoïdes IgM, IgA

Réactions lichénoïdes (lichen plan, réactions médicamenteuses et photodermatose)

• Norme Shaggy BMZ pour le fibrinogène
• Corps cytoïdes IgM, IgA

Porphyrie cutanée retardée

• Vaisseaux dermiques: coloration épaisse continue IgG, IgA, C3
• BMZ C3 granulaire, IgM
• BMZ linéaire IgG, IgA

Vascularite

• Vaisseaux dermiques forts IgM, IgG, C3, fibrinogène

Purpura de Henoch-Schönlein

• Vaisseaux dermiques IgA puissants

Quelle est la fiabilité des résultats d'immunofluorescence directe?

Le test DIF est modérément sensible pour détecter diverses maladies. La sensibilité du DIF se rapproche de 100% pour le groupe de maladies du pemphigus, et la sensibilité aurait été de 55-96% pour la pemphigoïde bulleuse. Une étude portant sur dix patients atteints de purpura de Henoch-Schönlein et neuf atteints de lupus érythémateux a démontré des tests positifs pour le DIF chez tous les patients.

Le nombre de résultats DIF faussement négatifs dépend de la qualité de l'échantillon, du traitement en laboratoire et de la question de savoir si le patient a été sous traitement ou non. Les raisons des faux résultats négatifs comprennent:

• Un site de biopsie incorrect
• Manque de épiderme en biopsie et autres erreurs techniques
• Stockage à long terme de l'échantillon avant son transport au laboratoire.
• Photoblanchiment et autres erreurs de laboratoire.
• Le patient est sous traitement immunomodulateur actif.