Imunofluorescência direta

O que é direto imunofluorescência?

A imunofluorescência direta (DIF) é uma técnica usada em laboratório para diagnosticar doenças da pele, rins e outros sistemas orgânicos. Também é chamado de teste imunofluorescente direto ou primário imunofluorescência

DIF envolve a aplicação de anticorpo–fluoróforo conjugado moléculas para amostras de tecidos de pacientes obtidas de biópsias. Esses anticorpos-fluoroforo conjugados alvo anormal depoimentos de proteínas no tecido do paciente. Quando exposto à luz, o fluoróforo emite sua própria frequência de luz, vista ao microscópio. O padrão de coloração específico e o tipo de proteína anormal. declaração visto na amostra de tecido ajuda a diagnosticar a doença.

Imunofluorescência direta para diagnóstico de doenças de pele.

DIF é útil na suspeita diagnóstica autoimune doença, tecido conjuntivo doenças e vasculite. Os padrões de coloração observados em amostras de tecido podem ser específicos de uma entidade patológica ou podem necessitar de interpretação clínica e histológico recomendações.

Autoimune bolhoso doenças

DIF é útil no diagnóstico das seguintes doenças bolhosas autoimunes:

• Pênfigo vulgar
• Pênfigo de folha
• Paraneoplástico pênfigo
• Imunoglobulina (Ig) A pênfigo
• Penfigoide bolhoso
• Penfigoide gestacional
• Mucoso penfigóide de membrana (cicatriz penfigoide)
• Epidermólise bolhosa adquirida

• Bolhoso sistêmico lúpus eritematoso (LES)

• Linear Doença de bolhas de IgA
• Dermatite herpetiforme

Doenças do tecido conjuntivo

DIF é útil para diagnosticar as seguintes doenças do tecido conjuntivo:

• Lúpus eritematoso sistêmico, discóidee subagudo cutâneo formas)

• Neonatal lúpus eritematoso
• Sistêmico esclerose
• Doença mista do tecido conjuntivo

• Dermatomiosite

Vasculite e outras condições.

A IFD é útil no diagnóstico de vasculite cutânea e alguns outros tipos de inflamatório Doença de pele:

• Embarcação pequena (hipersensibilidade) vasculite
• Henoch - Schönlein roxa
• Líquen plano
• Porfiria cutânea tardia
• Algumas reações cutâneas adversas a medicamentos.
• Fotossensibilidade erupções cutâneas

Local de biópsia

O local ideal para fazer uma biópsia de pele depende da doença suspeita.

• Doenças de bolhas auto-imunes: assume uma aparência normal perilesional pele a menos de 1 cm de uma bulla. Como podem surgir resultados falso-negativos em amostras dos membros inferiores, evite estes locais, se possível.
• Doenças do tecido conjuntivo: a biópsia deve ser retirada de um ferimentos (geralmente em áreas expostas ao sol), idealmente com mais de 6 meses, mas ainda ativo. Uma amostra adicional geralmente é coletada em um local protegido do sol.
• Vasculite: Para obter melhores resultados, faça um biópsia por agulha ou um profundobiópsia de barbear de uma lesão com menos de 24 horas.

Outra biópsia geralmente é feita para hematoxilina-eosina (H&E) de rotina. histologia. Observe que o local ideal da biópsia e o cronograma necessário diferem para esses exemplos.

• Doenças de bolhas auto-imunes: excluir um número inteiro vesícula ou biópsia da borda de uma bolha.
• Vasculite: Selecione uma lesão purpúrica com duração inferior a 72 horas.

Transporte e armazenamento da amostra de biópsia.

As amostras para DIF não devem ser colocadas em formalina, pois isso altera as proteínas e diminui significativamente a precisão dos resultados. Transporte a amostra para o laboratório o mais rápido possível. As opções para transportar a amostra incluem:

• Colocado em um salinagaze encharcada
• em solução salina solução
• Em mídias especiais (por exemplo, Michel ou Zeus)
• Congelado em nitrogênio líquido (a amostra não deve descongelar).

Cada laboratório possui seus próprios protocolos. Amostras em solução salina podem produzir superior sensibilidade em relação a outras mídias se processado dentro de 24 a 48 horas.

O que acontece com a amostra no laboratório?

O DIF pode ser realizado em máquina automatizada ou manualmente. O processo envolve primeiro fazer cortes congelados e depois realizar imunofluorescência.

Preparando seções congeladas

1. A biópsia por agulha é transportada para o laboratório em gaze embebida em solução salina.
2. A amostra é colocada em um gel.
3. O nitrogênio líquido é usado para congelar a amostra e o gel.
4. A amostra congelada está contida no gel congelado.
5. A amostra pode ser armazenada em nitrogênio líquido por cerca de uma semana.
6. Fatias com 4–6 mícrons de espessura são cortadas.

Realizando imunofluorescência direta.

1. São feitos cinco ou seis slides; cada um por um diferente reagente. Uma lâmina será usada para uma coloração H&E normal.
2. Uma caneta especial é usada para desenhar um perímetro para manter reagentes dentro dos slides.
3. As lâminas são lavadas.
4. Os reagentes são compostos.
5. Os reagentes (anticorpo-fluoroforo são conjugados com IgG, IgM, IgA, complemento Proteína C3, e quando necessário fibrinogênio) são colocados nos slides e os slides são deixados por um tempo no escuro.
6. As lâminas são lavadas novamente em solução.
7. Tampas de vidro são colocadas sobre as lâminas.

Interpretação da imunofluorescência direta.

As lâminas de imunofluorescência preparadas são examinadas usando um patologista para determinar os locais primários de deposição imunológica (se houver), classes de imunoglobulina ou outra deposição imunológica e padrões de deposição. Os padrões de coloração podem ser classificados em cinco grupos:

• Padrão de coloração de superfície intercelular (ICS)
• Linear área da membrana basal Padrão (BMZ)
• Padrão granular BMZ
• Padrão desgrenhado BMZ
• Vascular e outros padrões.

Exemplos de padrões de coloração.

• Padrão de coloração do espaço intercelular (tela de arame), pênfigo vulgar.
• Padrão de coloração do espaço intercelular (tela de arame), pênfigo foliáceo.
• Deposição linear de IgG na zona da membrana basal, penfigoide bolhoso.
• Deposição linear de IgA na zona da membrana basal, IgA linear bolhosa doença de pele.
• Padrão de coloração vascular em dérmico vasos para IgM.
• Deposição granular de C3 na zona da membrana basal

Padrões de coloração de doenças de pele específicas.

Pênfigo vulgar

• Padrão ICS IgG (90–100%) ou C3

Pênfigo de folha

• Padrão ICS IgG ou C3

Pênfigo paraneoplásico

• Padrão ICS fraco
• BMZ IgG ou C3 linear ou granular
• Algumas vezes, liquenóide mudar

Pênfigo IgA

• CI com IgA

Penfigoide bolhoso

• BMZ linear com IgG e BMZ linear com C3

membrana mucosa penfigoide (penfigoide cicatricial)

• BMZ linear com IgG, C3 e IgA

Epidermólise bolhosa adquirida

• Linear BMZ IgG e C3
• Às vezes, BMZ IgA ou IgM linear

Dermatite herpetiforme

• BMZ granulado com IgA
• Às vezes granular BMZ C3
• Raramente, BMZ granular IgG e M3

Lúpus eritematoso

• Lúpus eritematoso sistêmico
  • BMZ granular IgG, IgM, IgA, C3
  • Mosqueado epidérmico núcleos Padrão IgG (10-15%)
• Lúpus eritematoso discóide
  • BMZ granular IgG, IgM
  • Corpos citóides IgM e IgA
• Lúpus eritematoso cutâneo subagudo
  • BMZ granular IgG, IgM, C3
  • Epidérmico intracitoplasmático Deposição de partículas IgG
  • Corpos citóides IgM, IgA

Esclerose sistêmica

• BMZ IgM granulado
• Deposição manchada de núcleos epidérmicos (20%)

Doença mista do tecido conjuntivo

• BMZ granulado (15%)
• Padrão de núcleos epidérmicos salpicados IgG (46–100%)

Dermatomiosite

• granular IgM, IgG, C3
• Corpos citóides IgM, IgA

Reações liquenóides (líquen plano, reações medicamentosas e fotodermatose)

• Padrão Shaggy BMZ para fibrinogênio
• Corpos citóides IgM, IgA

Porfiria cutânea tardia

• Vasos dérmicos: coloração espessa contínua IgG, IgA, C3
• BMZ granulado C3, IgM
• Linear BMZ IgG, IgA

Vasculite

• Vasos dérmicos fortes IgM, IgG, C3, fibrinogênio

Púrpura de Henoch-Schönlein

• Fortes vasos dérmicos de IgA

Quão confiáveis são os resultados da imunofluorescência direta?

O teste DIF é moderadamente sensível na detecção de uma variedade de doenças. A sensibilidade para DIF se aproxima de 100% para o grupo de doenças do pênfigo, e foi relatado que a sensibilidade é 55-96% para penfigoide bolhoso. Um estudo com dez pacientes com púrpura de Henoch-Schönlein e nove com lúpus eritematoso demonstrou testes positivos para IFD em todos os pacientes.

O número de resultados falsos negativos com DIF depende da qualidade da amostra, do processamento laboratorial e se o paciente está em tratamento ou não. As razões para resultados falsos negativos incluem:

• Um local de biópsia incorreto
• Falta de epiderme em biópsia e outros erros técnicos
• Armazenamento prolongado da amostra antes do transporte para o laboratório.
• Fotodegradação e outros erros laboratoriais.
• O paciente está recebendo tratamento imunomodulador ativo.