Immunofluorescence indirecte

Qu'est-ce qui est indirect immunofluorescence?

L'immunofluorescence indirecte, ou immunofluorescence secondaire, est une technique utilisée dans les laboratoires pour détecter la circulation. autoanticorps chez le patient sérum. Il est utilisé pour diagnostiquer auto-immune Maladies vésiculées.

• Sans étiquette primaire des anticorps (utilisé comme marqueur pour Cancer, diabète et maladie d'Alzheimer) du sérum du patient rejoignent la cible molécule dans des échantillons de tissus préalablement préparés.
• Anticorps secondaires (utilisés comme marqueur de VIH), conjuguer avec un colorant fluorescent tel que l'isothiocyanate de fluorescéine (FITC), il se lie au primaire anticorps.
• Lorsqu'il est exposé à la lumière, le colorant fluorescent est excité et émet une longueur d'onde qui peut être vue sous un microscope à fluorescence.

Le tissu substrats utilisé (œsophage de singe ou peau humaine) dépendra de la suspicion de maladie. Différents modèles de coloration aideront à diagnostiquer un auto-immun bulleux maladie.

Pour quelles affections cutanées les cloques sont-elles testées par immunofluorescence indirecte?

L'immunofluorescence indirecte est utilisée pour diagnostiquer les cloques auto-immunes suivantes:

• Pemphigus vulgaris
• Pemphigus à feuilles
• Paranéoplastique pemphigus
• Immunoglobuline (Ig)A pemphigus
• Linéaire IgA bullous maladie de peau et chronique maladie bulleuse infantile
• Dermatite herpétiforme
• Pemphigoïde bulleuse
• Pemphigoïde gestationnelle
• Muqueux pemphigoïde membranaire
• Epidermolyse bulleuse acquise

• Bullous systémique lupus érythémateux.

La méthode de laboratoire

Préparation du sérum du patient pour le test.

1. 5 à 10 ml de sang sont prélevés et recueillis dans un tube.
2. Le sang peut coaguler.
3. L'échantillon de sang est centrifugé pour séparer le sérum du caillot.
4. Le sérum est divisé en parties et congelé jusqu'à ce qu'il soit testé.

Le test d'immunofluorescence indirecte

1. Le tissu est coupé en tranches de 4 à 6 microns d'épaisseur pour le tissu substrat diapositives (cela peut être fait dans un laboratoire, ou des diapositives peuvent être obtenues dans le commerce).
2. Diverses lames sont préparées avec différents substrats tissulaires.
3. Les coupes de tissus sont incubées avec du sérum de patient pendant 30 minutes et une double dilution est effectuée si des titres sont nécessaires.
4. Les lames sont lavées pour éliminer les anticorps primaires non liés.
5. Les lames sont incubées pendant 30 minutes supplémentaires avec des anticorps secondaires contenant un colorant fluorescent.
6. Chaque diapositive est montée sous une lamelle.
7. Chaque lame est examinée en utilisant la fluorescence microscopie.

Interpréter les résultats de l'immunofluorescence indirecte.

Les lames immunofluorescentes sont examinées pour déterminer la présence d'auto-anticorps à travers les profils d'immunité. déclaration. Les résultats sont que l'immunofluorescence subjective et indirecte ne peut pas être utilisée de manière fiable pour contrôler la gravité de la maladie et son traitement.

Les différents modèles de coloration observés avec l'immunofluorescence indirecte comprennent:

• Schéma de coloration de l'espace intercellulaire (ICS)
• Zone de la membrane basale (BMZ) motif de coloration.

La sensibilité d'un outil de diagnostic se réfère à sa capacité à identifier avec précision les personnes atteintes de la maladie (c'est-à-dire à produire un vrai résultat positif). La spécificité d'un outil de diagnostic se réfère à sa capacité à identifier avec précision ceux qui ne sont pas atteints de la maladie (c'est-à-dire à produire un résultat vraiment négatif).

Parfois, un test peut également produire de faux résultats. Donc:

• Le résultat peut être négatif même si le patient a la maladie (c'est-à-dire qu'il produit un faux résultat négatif).
• Le résultat peut être positif chez un patient sans maladie (c'est-à-dire produire un résultat faussement positif).

Modèles immunofluorescents des maladies de la peau.

Les profils immunofluorescents observés dans les affections cutanées suivantes sont décrits ci-dessous.

Pemphigus vulgaris

Dans le pemphigus foliáceo, la inmunofluorescencia indirecta muestra:

• Un schéma de coloration ICS avec des dépôts IgG ou C3
• Une sensibilité de 81–87% [4.7]
• Une spécificité du 81% [7].

Pemphigus à feuilles

Dans le pemphigus foliáceo, la inmunofluorescencia indirecta muestra:

• Modèle ICS IgG ou C3
• 60-86% [4,7].

Pemphigus paranéoplasique

Dans le pemphigus, l'immunofluorescence indirecte montre:

• Anticorps C3 et IgG
• Une sensibilité du 80%. [3]
• Une spécificité du 83% [3].

Pemphigoïde bulleuse

Dans la pemphigoïde bulleuse, l'immunofluorescence indirecte montre:

• Un motif de coloration linéaire BMZ avec des dépôts d'IgG et de C3
• Une sensibilité de 70% [3].

Membrane muqueuse pemphigoïde

Dans la pemphigoïde muqueuse, l'immunofluorescence indirecte montre:

• Un schéma de coloration BMZ avec des anticorps IgG ou IgA
• Une sensibilité de 20%. [3].

Pemphigoïde gestationnelle

Dans la pemphigoïde gestationnelle, l'immunofluorescence indirecte montre:

• Dépôts C3
• Une sensibilité de 93% [3].

Epidermolyse bulleuse acquise

Dans l'épidermolyse bulleuse acquise, l'immunofluorescence indirecte montre:

• Un motif de coloration linéaire BMZ avec des anticorps IgG
• Une sensibilité de 50%. [3].

Dermatite herpétiforme

Dans la dermatite herpétiforme, l'immunofluorescence indirecte montre:

• Anticorps anti-endomysiaux IgA
• Une sensibilité du 80%. [3].

Dermatose bulleuse à IgA linéaire et maladie bulleuse chronique infantile

Dans la dermatose bulleuse à IgA linéaire et la maladie bulleuse chronique infantile, l'immunofluorescence indirecte montre:

• BMZ avec des anticorps IgA
• Une sensibilité de 50%. [3].

Lupus erythematosus bulleux

Dans le lupus érythémateux systémique bulleux, l'immunofluorescence indirecte montre un schéma linéaire de BMZ avec des anticorps IgG.