Imunofluorescência indireta

Lo que es indirecto imunofluorescência?

La inmunofluorescencia indirecta, o inmunofluorescencia secundaria, es una técnica utilizada en los laboratorios para detectar la circulación. autoanticorpos en paciente sérum. Se usa para diagnosticar autoimune Enfermedades ampollas.

• Sin etiquetar primário anticorpos (utilizado como marcador para Câncer, diabetes y enfermedad de Alzheimer) del suero del paciente se unen al objetivo molécula en muestras de tejido preparadas previamente.
• Anticuerpos secundarios (utilizados como marcador para HIV), conjugado con un colorante fluorescente como el isotiocianato de fluoresceína (FITC), se une al primario anticorpo.
• Cuando se expone a la luz, el tinte fluorescente se excita y emite una longitud de onda que se puede ver con un microscopio fluorescente.

El tejido substratos utilizado (ya sea esófago de mono o piel humana) dependerá de la sospecha de enfermedad. Diferentes patrones de tinción ayudarán a diagnosticar un autoinmune bolhoso doença.

¿Para qué afecciones de la piel con ampollas se prueba la inmunofluorescencia indirecta?

La inmunofluorescencia indirecta se usa para diagnosticar las siguientes enfermedades ampollosas autoinmunes:

• Pênfigo vulgar
• Pênfigo de folha
• Paraneoplástico pênfigo
• Imunoglobulina (Ig) A pênfigo
• Linear IgA bolhoso doença de pele e crônica enfermedad ampollosa de la infancia
• Dermatite herpetiforme
• Penfigoide bolhoso
• Penfigoide gestacional
• Mucoso penfigoide de membrana
• Epidermólise bolhosa adquirida

• Bolhoso sistêmico lúpus eritematoso.

El método de laboratorio

Preparación del suero del paciente para la prueba.

1. Se extraen 5–10 ml de sangre y se recogen en un tubo.
2. La sangre se deja coagular.
3. La muestra de sangre se centrifuga para separar el suero del coágulo.
4. El suero se divide en partes y se congela hasta la prueba.

La prueba de inmunofluorescencia indirecta

1. El tejido se corta en rodajas de 4 a 6 micras de grosor para el tejido substrato portaobjetos (esto se puede hacer en un laboratorio, o los portaobjetos se pueden obtener comercialmente).
2. Se preparan varios portaobjetos con diferentes sustratos de tejido.
3. Las secciones de tejido se incuban con suero del paciente durante 30 minutos y se realiza una dilución doble si se requieren títulos.
4. Los portaobjetos se lavan para eliminar los anticuerpos primarios no unidos.
5. Los portaobjetos se incuban durante otros 30 minutos con anticuerpos secundarios que contienen un colorante fluorescente.
6. Cada diapositiva está montada debajo de un cubreobjetos.
7. Cada diapositiva se examina usando fluorescencia microscopia.

Interpretar los resultados de la inmunofluorescencia indirecta.

Los portaobjetos inmunofluorescentes se examinan para determinar la presencia de autoanticuerpos a través de los patrones de inmunidad. declaração. Los resultados son subjetivos y la inmunofluorescencia indirecta no se puede utilizar de manera confiable para controlar la gravedad de la enfermedad y su tratamiento.

Los diferentes patrones de tinción observados con inmunofluorescencia indirecta incluyen:

• Patrón de tinción del espacio intercelular (ICS)
• Zona de la membrana basal (BMZ) patrón de tinción.

La sensibilidad de una herramienta de diagnóstico se refiere a su capacidad para identificar con precisión a las personas con la enfermedad (es decir, producir un resultado positivo verdadero). La especificidad de una herramienta de diagnóstico se refiere a su capacidad para identificar con precisión a quienes no tienen la enfermedad (es decir, producir un resultado verdaderamente negativo).

Ocasionalmente, una prueba también puede producir resultados falsos. Por lo tanto:

• El resultado puede ser negativo incluso si el paciente tiene la enfermedad (es decir, produce un resultado falso negativo).
• El resultado puede ser positivo en un paciente sin la enfermedad (es decir, producir un resultado falso positivo).

Patrones inmunofluorescentes de enfermedades de la piel.

Los patrones inmunofluorescentes observados en las siguientes enfermedades de la piel se describen a continuación.

Pênfigo vulgar

No pênfigo foliáceo, la inmunofluorescencia indirecta muestra:

• Un patrón de tinción ICS con depósitos de IgG o C3
• Una sensibilidad del 81–87% [4,7]
• Una especificidad del 81% [7].

Pênfigo de folha

No pênfigo foliáceo, la inmunofluorescencia indirecta muestra:

• Padrão ICS IgG ou C3
• 60-86% [4,7].

Pênfigo paraneoplásico

En el pénfigo, la inmunofluorescencia indirecta muestra:

• Anticuerpos C3 e IgG
• Una sensibilidad del 80%. [3]
• Una especificidad del 83% [3].

Penfigoide bolhoso

En el penfigoide ampolloso, la inmunofluorescencia indirecta muestra:

• Un patrón de tinción lineal BMZ con depósitos de IgG y C3
• Una sensibilidad del 70% [3].

membrana mucosa penfigoide

En el penfigoide de la membrana mucosa, la inmunofluorescencia indirecta muestra:

• Un patrón de tinción de BMZ con anticuerpos IgG o IgA
• Una sensibilidad del 20%. [3].

Penfigoide gestacional

En el penfigoide gestacional, la inmunofluorescencia indirecta muestra:

• Depósitos C3
• Una sensibilidad del 93% [3].

Epidermólise bolhosa adquirida

En la epidermólisis ampollosa adquirida, la inmunofluorescencia indirecta muestra:

• Un patrón de tinción lineal BMZ con anticuerpos IgG
• Una sensibilidad del 50%. [3].

Dermatite herpetiforme

En dermatitis herpetiforme, la inmunofluorescencia indirecta muestra:

• Anticorpos anti-endomisiais IgA
• Una sensibilidad del 80%. [3].

Dermatosis ampollosa IgA lineal y enfermedad ampollosa crónica de la infancia

En la dermatosis ampollosa IgA lineal y la enfermedad ampollosa crónica de la infancia, la inmunofluorescencia indirecta muestra:

• BMZ con anticuerpos IgA
• Una sensibilidad del 50%. [3].

Lupus eritematoso ampolloso

En el lupus eritematoso sistémico ampolloso, la inmunofluorescencia indirecta muestra un patrón lineal de BMZ con anticuerpos IgG.